TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR

Francis Crick in his office. Behind him is a m...
Francis Crick. Fuente: wikipedia

Francis Crick in his office. Behind him is a model of the human brain that he inherited from Jacob Bronowski. (Photo credit: Wikipedia)

¿A qué se denominan técnicas de biología molecular?

En principio se denomina así a todas las técnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza, visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo (nacimiento de la Ingeniería genética), amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas (clonación de fragmentos en bacterias u otros vectores como virus y PCR), corte de una determinada región con enzimas de restricción para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment length polymorphism), que significa: diferencias en los tamaños de los fragmentos de restricción debido a polimorfismos en el ADN entre otras.

Aqui les dejo para que vean como se hace una extracción de ADN en forma casera. Hagan click aquí

Todas estas técnicas tiene diversas aplicaciones generalmente en el diagnóstico de enfermedades hereditarias, búsqueda de alelos mas o menos frecuentes asociados a una característica que nos interesa seleccionar, diagnóstico de contaminación bacteriana en alimentos (detección de Escherichi coli 0257, cepas diferentes de Salmonellas, Mycobacterium sp) diagnóstico viral o de infección viral (HIV, hepatitis C, PIF, otros), selección de marcadores moleculares para asistir en el mejoramiento genético de una especie, test de paternidad, diagnóstico de identidad forense, etc.

La primera técnica que todas las demás necesitan es la extracción del ADN, y para ello es necesario purificarlo desde cualquier tejido aunque usualmente se hace a partir de sangre. Se basa en una serie de lavados de la muestra y agregado de proteinasas que eliminan las proteínas del medio, detergentes para eliminar las membranas plasmáticas y luego ir purificando el ADN de esa mezcla de ARN proteínas y restos celulares.

Primeras etapas de la extracción de ADN, en este caso precipitado de células a partir de las cuales se obtendrá el ADN. Fuente: Science Photo library
Primeras etapas de la extracción de ADN, en este caso precipitado de células a partir de las cuales se obtendrá el ADN. Fuente: Science Photo library
ADN precipitado en alcohol Fuente: Science photo library.  La figura muestra el pellet o precipitado de células a partir del cual se obtendrá el ADN
ADN precipitado en alcohol Fuente: Science photo library. La figura muestra el pellet o precipitado de células a partir del cual se obtendrá el ADN

213 comentarios sobre “TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR

    1. Hola Alexander, espero no llegar muy tarde a responderte.
      En el diagnóstico genético prenatal se hace el cariotipo (se hace una amniocentesis, vellosidades coriales). Sí, parece algo anticuado, pero nos dice si el feto tiene los 23 pares de cromosomas o no y también se pueden observar pequeñas variaciones en los patrones de bandas. La técnica de FISH es otra que se realiza. Por fluorescencia vemos si las células tienen dos cromosomas de cada uno (13, 18, 21, X e Y). Si el ecografista observa “algo extraño” y las pruebas de citogenéticas son normales, se realiza un CGH array. Aquí veremos si hay ganancia o pérdida de pares de bases, es bastante más específico ya que una microdeleción no se ve en el patrón de bandas del cariotipo.
      Si hablamos del diagnóstico genético PREIMPLANTACIONAL, pues bueno… aquí se extraen las blastómeras del embrión y se analizan. En estos casos vamos buscando algo más específico, se supone que la pareja ha tenido varios abortos de repetición y no se sabe por qué o que incluso ellos saben que son portadores de alguna enfermedad genética, entonces ya vas a secuenciar la parte del genoma donde sabes que ocurre la mutación a esa enfermedad. Además de hacer el test prenatal que incluyen los cromosomas que te nombré antes. Lo principal es la extracción de DNA y “meterlo” en el secuenciador.
      Sólo como apunte, la secuenciación masiva es el presente-futuro. Yo hice un postgrado en 2015 donde lo más novedoso era la NGS, la secuenciación de cuarta generación. En verano acabé el máster de reproducción asistida y ya la cuarta generación de secuenciación está “obsoleta”. Esto va muy muy rápido.
      Saludos!

  1. Muy buen dia..! Doctora estoy leyendo su pagina, y la felicito, la encuentro muy interesante y enriquecedora, actualmente realizo mi trabajo de tesis y estoy muy confundida con una parte de mi metodologia, quisiera preguntarle en cuanto a las tecnicas moleculares para analisis microbiologico como checkerboard Hibridizacion, PCR, real timePCR , cual de ellas seria mejor o mas especifica y/o sensible para el analisis de calidad de colonizacion de microorganismos, o con cual podria trabajar mejor estadisticamente, cual es mas sensible o especifica?
    muchas gracias por su tiempo, agradezco toda la informacion que me pueda suministrar al respecto.

    1. Hola vrmarisol, la verdad es que es no tengo experiencia en colonización de microorganismos como para aconsejarte cual es la mejor estrategia en la metodología. La mejor persona para responer eso es tu director/a de tesis. En caso de que aún no tengas bajá todos los artículos que tengas sobre el tema y fijate cual es la metodología más aplicada. Nada mejor que la bibliografía para basarse en algo concreto. Espero que tengas suerte. !! saludos

  2. Hola, a todos para saber si alguien trabaja o ha trabajado con mycobacterium bovis, resulta que he implementado algunos protocolos de extraccion de ADN de mycobacterium bovis a partir de tejido bovino, en la cauntificacion con nanodrop tengo un promedio de 100ng/ul pero la pureza promedio 1.0, y no he logrado la amplificacion de mi fragmento que requiero para la identificacion molecular. Si alguen tiene un protocolo infalibrl de extraccion de adn para mycobacterium a partir de tejido por favor comuniquese conmigo.

  3. ¿Cómo podría asegurarse que el material que ha purificado realmente es DNA
    Cómo podría saber si hay proteínas contaminando su preparación de DNA?
    Cómo podría asegurarse que el material que ha purificado realmente es DNA
    De ante mano muchas gracias !!! por si me pueden ayudar ..

    1. Hola podrías medir la densidad óptica con un espectro fotometro. A 260 nanómetros y a 280 que es donde miden las proteínas. Luego sacas una relación entre ambas 260/280 y debe dar 1.6 a 1.8. Espero que te sirva

      1. Hola Alondra la verdad es que no lo sé. SOy Médica Veterinaria y no tengo experiencia en diagnóstico en humanos. Lamento no poder ayudarte
        Saludos

  4. Hola buenas tardes, estaba leyendo un paper y me salio que utilizaron un analisis 2-DE del proteoma de B. cinerea ¿Alguién me podría explicar en que consiste esta tecnica o en su defecto otorgarme literatura donde pueda aprender esto? de antemano muchas gracias

  5. Buenas tardes, tengo una duda al realizar mi PCR, para amplificar fragmentos ITS de hongos, en algunas ocasiones no obtengo amplicones, lo cual es raro por que previa extracción de DNA los leo en un nanodrop y observo que tengo calidad y cantidad de DNA.

    Muchas gracias de antemano.

    Saludos,
    Francisco

    1. Francisco en mi experiencia, al menos las PCR a aveces no se sabe por que, no amplifican. Me ha pasado a veces que por meses una PCR que salí perfecta, dejaba de amplificar.
      Es una técnica con sus problemas…eso sí no te confies demasiado en el Nanodrop, siempre es bueno ver el ADN en un gel!!

  6. hola quisiera urgente su ayuda en encontrar una técnica de extracción purificación identificación y cuantificación de DNA polimerasa B2 de la Entamoeba histolytica ……cualquier contribución con este tema sera muy agradecido, también con la caracterización de la enzima DNA ligasa de Trichomonas vaginalis.

  7. Otra vez molestando.. Tengo que resolver un ejercicio y no lo entiendo. Ej: Para el control de paternidad en los caballos pura sangre de carrera utilizan los sig. microsatélites:
    -AHT4: tamañano de los alelos posibles 155, 180, y 204 pb
    -ASB2: tamaño de los alelos posbiles 80, 95 y 110 pb

    No sé que me está diciendo con eso!!! Me desespera jaja.

    1. Matatac no sé que es lo que espera el profesor o prefesora que vos logres comprender pero como verás yo no dejo ejercicios en mi Blog, lo hago en clase con mis alumnos o por otras vías. Deberías preguntar a tu prefesor. Yo lo único que veo es que te dice es lo de posibles tamaños de los alelos de los microsatéiltes en la población general

Gracias por tu comentario, en cuanto pueda te contesto

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