TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR

Test de paternidad microsatélites o VNTRs

En el caso de los test de paternidad, hoy en día se hacen por PCR seguida de un análisis de unos 9 a 13 VNTRs (numero variable de repeticiones en tandem del tipo de los minisatélites o secuencias de a 10 hasta 60 bases que se repiten) en una misma reacción seguida de la visualización en geles de poliacrilamida con la ayuda de un secuenciador automático. En este caso se amplifican sitios específicos del genoma, que poseen un numero variable de secuencias repetidas. actgactgacgt actgactgactg actgactgactg actgactgatga actgactgactg En este caso son 12 pb que se repiten 4 veces en uno de nuestros cromosomas (el materno o paterno) o sea que quizás yo (Gabriela) poseea 3 repeticiones en el materno y 10 en el paterno. Otra persona podría tener 5 y 15, otra 10 y 12 etc. Cuanto más variable es el numero de repeticiones, más precisa es la técnica. De este tipo de repeticiones se amplifican por PCR varias distintas (localizadas en distintas regiones del genoma) 9 a 13 en cada individuo y los fragmentos se ven luego en geles y se separan por tamaños. El esquema de abajo muestra un ejemplo con sólo 3 repeticiones en el Individuo A, B y C. El tamaño de la banda de lo amplificado varía según el No de repeticiones que cada persona tenga. Otros tipos son los STRs (short tandem repeats o repeticiones cortas en tandem de 2 a 6 pb de longitud que se repiten) Por ejemplo GCGA.GCGA.GCGA etc

Esquema de VNTRs o microsatélites y su interpretación
Imagen original de la Universidad de Arizona, traducida por Gabriela Iglesias
Interpretación en geles de los VNTRs
Ejemplo de 3 VNTRs en 3 diferentes individuos. Por ejemplo, se representan en distintos colores 3 pares de cromosomas homólogos y 3 VNTRs o repeticiones en tres cromosomas distintos. El No 1 en un cromosoma (azul ) con dos variantes en cada homólogo, por ejemplo en el materno 24 pares de bases (por ejemplo sea 6 repeticiones de 4 nucleótidos) y en el cromosoma paterno del Individuo A: unas 3 repeticiones de 4 bases: 12 nucleótidos en total. Eso da como resultado en un gel: dos bandas una de unas 24 pares de bases y una de 12 pares de bases. En la misma reacción de PCR se amplifican los tres minisatélites. Por ende cada individuo muestra un patrón de bandas, producto de la cantidad de bases de cada repetición por el numero de bases que se repiten de cada VNTR amplificado . En este caso el individuo A tiene las bandas de 24 y 12 del VNTR 1, una de menos de 5 bases y una de 15 bases del cromosoma verde (VNTR 2) y una de 10 y otra de 30 del cromosoma rojo (VNTR 3). Este individuo A es heterocigota para los 3 VNTRs Imagen modificada por Gabriela Iglesias

Otro ejemplo se ve en la siguiente imágen

Esquema del uso de VNTRs  y sus usos
En este caso hay otro ejemplo de dos VNTRs A y B en dos individuos 1 y 2. Cada VNTR tiene dos variantes o alelos, el A por ejemplo, A5 y A2 en el Individuo 1 o el A3 y A4 en el Individuo 2. Imagen obtenida de DNA Profiling
Análisis de varios VNTRS al mismo tiempo Fuente: Sciencephotolibrary
Análisis de varios VNTRS al mismo tiempo Fuente: Sciencephotolibrary

Usos en la criminología o medicina forense en este caso con Southern blot y RFLP

213 comentarios sobre “TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR

  1. Hola Dra. Gabriela
    Podrías darme ejemplos de el uso de técnicas bioquímicas y/o moleculares en CLINICAS VETERINARIAS. Tengo la información de técnicas como electroforesis, Elisa, fraccionamiento celular, citometria de flujo, cristalografia de rayos X etc
    pero no se especificamente cuando se utilizan en una clínica veterinaria.
    espero puedas ayudarme, Gracias!!

    1. Hola Paula, si en el Blog mismo está lleno de artículos de usos de electroforesis y PCR en Medicina veterinaria. Hya varias monografías hechas por alumnos de detección de enfermedades hereditarias en animales. te dejo dos links aqui pero hay más, solo tenes que buscar en el blog. Una es esta y la otra es esta pagina
      Espero te sirvan
      saludos

      1. HOLA DRA! QUISIERA SABER SI SE PUEDE MEDIR EL DAÑO DE LA OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS O ADN OCASIONADO POR RADICALES MEDIANTE UNA SECUENCIACION POR MÉTODO SANGER……..?

    1. Hola Luz, eso sería por muchas tecnologías posibles, pero para decirte o comentarte alguna podrías usar un virus al que se le remueven los genes patógenos, y se le introduce el gen en cuestión (esto depende del tamaño del gen, si es muy grande..no se puede). Luego una vez que el virus está armado, se lo podrias inyectar al deportista (esta es una de las posibles formas) pero en esta página no lo tengo descripto. Vas a poder encontrarlo usando plásmidos bacterianos tambien o cromosomas artificiales o inlcuso se ha probado inyectando ADN. La tecnica para introducir un gen en un plasmido bacteriano se llama transformación. Buscala en google hay mucho lugares que lo describen o buscá terapia génica. Aqui solo hay decriptas algunas técnicas generales que son necesarias para hacer luego estas cosas, por ejmplo para crtar ADN necesitas enzimas de restriccion. Siento no haber escrito sobre el tema en detalle. Saludos

Gracias por tu comentario, en cuanto pueda te contesto

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