TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR

Diagnóstico por PCR- RFLP

¿Por que detectan mutaciones estas enzimas ?  porque como reconocen una secuencia específica de 6 o 4 pares de bases, al aparecer una mutación se puede perder el que era un sitio de corte para una enzima o al revés se puede generar un sitio de corte en el ADN.

Si podemos amplificar por PCR un segmento o porción de un gen, y luego le agregamos una enzima de restricción puede que se produzcan fragmentos, si en el ADN amplificado hay una o varias de esas combinaciones de 6 o 4 pares de bases. Quizás al comparar el gen normal con el mutado, se haya perdido o ganado un sitio de restricción para alguna de las miles de enzimas de restricción conocidas

Tipos de enzimasde restricción armendariz_ch13_fig-13-01
Ejemplos de dos tipos de enzimas de restricción.

Algunas de las miles de enzimas conocidas son:

Algunas de las enzimas de restricción de extremos romos y pegajosos
Fuente ALL Science

A modo de ejemplo y usando la imagen de arriba, si  por una mutación de la secuencia que reconoce BamHI, en vez de CCTAGG se cambia a CTTAGG, en ese segmento de ADN se pierde el sitio de corte de BamHI porque deja de reconocerlo y no corta. De modo que en un alelo normal, la enzima BamHI corta, por ejemplo generando dos fragmentos pero en el alelo mutado ya no corta, con lo que veríamos en un gel, solo un fragmento.  (puede verse graficado abajo)

Esta técnica puede usarse entre otras cosas para detección de alelos de un gen normales y mutados (enfermedades hereditarias) o para distinguir cepas bacterianas o virales o alelos más favorables para una característica de interés productivo para luego aplicarlo a la selección.

Un esquema se muestra para ver en que se basa el diagnóstico

pcr-rflp alelos-normal-y-mutado
Esquema original de JPH Cor 2004, modificado por Gabriela Iglesias
Esquema de la técnica de PCR-RFLP
Esquema original de JPH Cor 2004, modificado por Gabriela Iglesias

213 comentarios sobre “TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR

  1. Hola Dra. Gabriela
    Podrías darme ejemplos de el uso de técnicas bioquímicas y/o moleculares en CLINICAS VETERINARIAS. Tengo la información de técnicas como electroforesis, Elisa, fraccionamiento celular, citometria de flujo, cristalografia de rayos X etc
    pero no se especificamente cuando se utilizan en una clínica veterinaria.
    espero puedas ayudarme, Gracias!!

    1. Hola Paula, si en el Blog mismo está lleno de artículos de usos de electroforesis y PCR en Medicina veterinaria. Hya varias monografías hechas por alumnos de detección de enfermedades hereditarias en animales. te dejo dos links aqui pero hay más, solo tenes que buscar en el blog. Una es esta y la otra es esta pagina
      Espero te sirvan
      saludos

      1. HOLA DRA! QUISIERA SABER SI SE PUEDE MEDIR EL DAÑO DE LA OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS O ADN OCASIONADO POR RADICALES MEDIANTE UNA SECUENCIACION POR MÉTODO SANGER……..?

    1. Hola Luz, eso sería por muchas tecnologías posibles, pero para decirte o comentarte alguna podrías usar un virus al que se le remueven los genes patógenos, y se le introduce el gen en cuestión (esto depende del tamaño del gen, si es muy grande..no se puede). Luego una vez que el virus está armado, se lo podrias inyectar al deportista (esta es una de las posibles formas) pero en esta página no lo tengo descripto. Vas a poder encontrarlo usando plásmidos bacterianos tambien o cromosomas artificiales o inlcuso se ha probado inyectando ADN. La tecnica para introducir un gen en un plasmido bacteriano se llama transformación. Buscala en google hay mucho lugares que lo describen o buscá terapia génica. Aqui solo hay decriptas algunas técnicas generales que son necesarias para hacer luego estas cosas, por ejmplo para crtar ADN necesitas enzimas de restriccion. Siento no haber escrito sobre el tema en detalle. Saludos

Gracias por tu comentario, en cuanto pueda te contesto

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