¡¡4 millones de visitas!!

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No puedo creer, que ya hayan hecho click 4 millones de veces en este Blog, de esas muchas no habrán conducido a nada, pero significa que muchas muchas otras habré podido ayudar un poco a alguien que buscaba información. Así que mil gracias a todos Uds: Los lectores y usuarios de este Blog, ¡¡ que me ha dado tantas satisfacciones!!!

Gracias

Gaby

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Ganador de la 2da mención del premio UBA 2016

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Por 4ta. vez, la Universidad de Buenos Aires (UBA), me entrega un premio por el Blog: “Desde Mendel hasta las moléculas”. No sé muy bien si podré expresar lo que siento. Pero para mí sigue siendo un orgullo que la misma institución donde di mis primeros pasos como estudiante y luego como docente auxiliar de genética, graduada, sea la que me lo otorga.

Esa institución, en la Facultad de Ciencias Veterinarias, me vio crecer como persona y profesional, en ese ámbito tuve a mi hijo que iba al jardín maternal, cursé la carrera docente, parte mi de maestría en Biotecnología. Me dio a mis mejores amigos y enemigos. Allí evolucioné, cometiendo errores y aciertos.

Tuve dos grandes maestras en genética, la Dra. Susana Mirande y la Dra. María Cristina Miquel, que me contagiaron su pasión por la docencia y la investigación.  Las ganas de trabajar, cada vez mejor, a pesar de tiempos difíciles. Las ganas de transmitir mis conocimientos a mis alumnos, de tener responsabilidad como profesional. A ellas, mi eterna gratitud, porque además me trataron en lo personal como a una hija, y esas cosas son las que más valoro a medida que pasan los años.

Ese blog que surgió como necesidad de ayudar a mis alumnos con nuevas herramientas que los ayudaran en el proceso de aprendizaje y fue evolucionando. Desde de aquel pequeño blog que usaban mis alumnos de la UBA solamente, fue lentamente siendo accesible para toda gente de habla hispana, de otros países, de otras carreras, de otros institutos, de escuelas medias y de escuelas primarias también. Contribuyó a que los curiosos de la genética se animaran a leer, a gente que buscaba respuestas a problemas determinados. Evolucionó de tal forma que hoy acceden a el más docentes que alumnos, se usa como repositorio digital en cientos de aulas virtuales, figura como link en muchas otras páginas y blogs.

En mi nueva Institución, la Universidad Nacional de Río Negro (UNRN), he podido implementar nuevas tecnologías para evaluar a los alumnos, mediante desarrollo de monografías y de videos educativos, y eso se ha podido integrar al blog. Esa es la mejor forma en que un blog educativo se integra al aula. Así que mis gracias a la carrera de veterinaria de la UNRN que ha permitido dejar volar mi imaginación y convertirlo en una realidad.

Quiero agradecer a todos los seguidores del Blog a lo largo de estos años, a los 2500 seguidores de la página de Facebook del mismo, los de casi 800 de twitter @Mendelmoléculas por su apoyo y los 3.370.000 personas que alguna vez hicieron click en el Blog

Saludos

Gaby

Entre los 100 mejores Blogs de ciencia segun Lifeder

Me siguen mimando con estas alegrías, de ver que mi Blog está entre la selección de 100 mejores Blogs de divulgación en ciencia.

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Gracias Lifeder por elegirnos y por los criterios que han utilizado para esta selección

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La verdad es que es un honor figurar entre esa lista de Blogs tan maravillosos, a los que sido desde hace años.

Por sobre todo gracias por la forma de presentarlo:

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A quien le interese leer el artículo de Lifeder, hagan click aquí por favor.

Gracias nuevamente, saludos.

Gaby

Noticias

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Hola a todos los lectores, como muchos habrán notado a veces por razones de tiempo, no pudo escribir tan seguido como me gustaría. Pero nunca fué mi intención escribir todos los días en el Blog sino más bien, que se convirtiera en un repositorio digital para mis alumnos de lo que enseño año tras año en la materia Genética Básica, en la carrera de Veterinaria de la Universidad Nacional de Río Negro, Argentina.

Con respecto a las noticias de actualidad las mantengo mucho más frecuentemente en la página de Facebook del Blog. Allí comparto muchas de las cosas que me parecen interesantes en la web, así como en Twitter con usario: @Mendelmoleculas

Si ponen me gusta en la página de Facebook estarán actualizados de todas las novedades, incluso las que pongo en el Blog porque están conectadas

Espero les sirva la información. De todas formas en la columna derecha del Blog está el cuadro para poner me gusta en la página y hacerte seguidor asi como el de twitter

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Saludos a todos

Gaby

 

 

 

Curso 2016 Genética Básica. Pizarra digital

Hola a todos mis alumnos y bienvenidos al curso de genética Básica de la carrera de Veterinaria de la UNRN.

Les quiero dar la bienvenida y espero que disfrutemos juntos de la aventura de la genética.

Quería en particular dejarles el material con el que vamos a trabajar en el curso. Son dos pizarras digitales, una para la primera parte de la materia y otra para la segunda.

Se las dejo a ambas en este sitio para que puedan acceder todas las veces que sea necesario, imprimir o leer online, tanto las clases, como ver los videos o leer la bibliografía y/0 sitios recomendados. Recuerden que para descargar el materia debe poner (ver original)

Saludos

Espero les sirva y nos vemos en las clases

 

1ra parte

https://padlet.com/embed/k6qhwtzpa0

Link directo a la pizarra: https://padlet.com/chickmhc/k6qhwtzpa0

 

2da parte

 

Link directo ala pizarra: https://padlet.com/chickmhc/a4un2yrmeh

 

 

Saludos

Gaby

Seminario de enfermedades hereditarias en felinos

seminario enfermedades felinas

Para todos aquellos criadores de gatos interesados en aprender un poco acerca de las enfermedades hereditarias y como se trasmiten de padres a hijos, los invito a la charla o seminario que voy a dar para la Federación Argentina gatófila.

El día es el 9 de Julio de 15 a 18 hs. en la calle Sarmiento 1574 4to piso, dto. B en la Ciudad autónoma de Buenos Aires. Para más información e inscripción dirigirse a secretaria@fedagat.org. El arancel es de 300 pesos argentinos.

Los esperamos

Saludos

Sigo agradeciendo a los docentes

Todavía sigo sorprendiéndome al ver que este Blog que fuera creado solo para mis alumnos de genética en veterinaria de la Univ. de Buenos Aires, se haya convertido en un blog masivamente usado por alumnos de todas partes del mundo, en especial quiero decir gracias a los alumnos y docentes de México que ha sido siempre el país de mayor número de visitantes.

Pero es mayor aùn mi sorpresa cuando veo que cada vez más, este Blog se ha convertido en un recurso didáctico para múltiples Institutos y Universidades a través de sus plataformas virtuales o sus sitios web. He visto convertirse a mi blog educativo en un recurso educativo para otros docentes y esto me hace muy feliz.

Es todo un orgullo para mí ver que se cumple aquello que he creído durante muchos años y es que “el conocimiento hay que compartirlo”, yo he sido capaz de formarme gracias a la educación pública Argentina, así que siempre he sentido que es mi obligación devolver eso a mis alumnos y a otros docentes, así que puedo decir “tarea cumplida”

Hoy quiero agradecer a dos sitios:

El Blog de , denominado: Recursos de Biología Molecular y que sugiere a nuestro Blog entre sus preferidos

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Por otra parte al ISFD (Instituto superior de Formación docente) N°36 de José C Paz, Pcia de Buenos Aires, Argentina.

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En particular, este instituto forma docentes, asì que mayor aùn mi orgullo. Además este Blog fué creado por Melisa Sanchez, merecedora de 1ra. Mención de los Premios UBA (Universidad de Buenos Aires) a Edublogs, así que además mis felicitaciones.

 

Gracias a todos por confiar y valorar mi trabajo de tantos años

Gracias

Gaby

Parálisis Periódica Hiperkalémica (HYPP) en equinos. Monografías de alumnos

En esta ocasión les dejo la monografìa realizada por la alumna Betiana Tscherig acerca de la  Parálisis Periódica Hiperkalémica (HYPP) en equinos y su forma de diagnóstico por técnicas de biología molecuar. Espero les sirva a todos aquellos en el camino de aprender y los interesados en aprender sobre el tema

Saludos

Gaby

Tscherig. Imagen 2

Escuela de Medicina Veterinaria y Producción agroindustrial.

Parálisis Periódica Hipercalémica (HYPP) en Equinos.

Curso de Genética básica a cargo de Iglesias, Gabriela, año 2015.

Alumna Tscherig Betiana.

 

Parálisis periódica hipercalémica (HYPP) en equinos.

 

Con la presente monografía se darán a conocer con detalles, aspectos propios de la Parálisis Periódica Hipercalémica (HYPP) haciendo especial hincapié en el área genética. Se trata de una enfermedad genética de tipo autosómica dominante presente en los equinos que básicamente afecta los canales de sodio en las células del músculo y la capacidad para regular los niveles de potasio en la sangre.

Esta enfermedad presenta una amplia variedad de síntomas clínicos y se generalizó cuando los criadores trataron de producir caballos con musculatura pesada. Hipótesis que posteriormente se descartó.

Se debe tener presente que dicha afección no solo se produce en equinos sino que también lo hace en los seres humanos, en los cuales se denomina Gamstorp adynamy episódica.

Características propias de la Parálisis Periódica Hipercalémica.

 

Herencia.

La Parálisis Periódica Hipercalémica es una enfermedad muscular que se presenta en los descendientes del semental  Cuarto de Milla “Impressive” (AQHA 767246), oriundo Oklahoma, Estados Unidos. El semen de este equino fue seleccionado y utilizado de manera intensa gracias a las cualidades de conformación de dicho semental, desconociendo aún la mutación. Tal es así que a partir del año 2003 se registraron más de 55.000 equinos vivos relacionados en su genealogía con Imprenssive (según registros de la AQHA), pero se sabe que contribuyó a la composición genética de 2.9 millones de caballos registrados (Rudolph et al., 1992).

En la actualidad se dice que la Parálisis Periódica Hipercalémia equina se presenta en 1 de cada 50 caballos cuarto de milla. También se ha reportado su presencia en varias líneas de caballos tales como Apaloosa y Pintos (Church 1995, Rudolph et a/, 1992).

En 1996, el Dr. Naylor sugirió como hipótesis que las anomalías en la transmisión del potencial de membrana de los caballos HYPP-positivo podrían conducir a la hipertrofia muscular característica en esta línea. Doctores expertos de la Universidad de California Davis y de la Universidad de Valberg, Minnesota, llevaron a cabo los análisis musculares para apoyar o refutar esta hipótesis mediante biopsias del músculo glúteo pero no encontraron ninguna diferencia en cuanto al porcentaje de contracción, edades o tamaño de las fibras y ninguna asociación con la gravedad clínica. Por lo tanto, su investigación descartó la hipótesis del Dr. Naylor.

 

Características genéticas.

La parálisis periódica hipercaliémica (HYPP) es una enfermedad genética de herencia autosómica dominante, es decir que es requerida una sola copia del gen (alelo) para que se presente la enfermedad.

Durante un estudio genético llevado a cabo en Stichting Klinisch Genetisch Centrum de Leiden (Holanda) en humanos se determinó que la enfermedad está causada por mutaciones en el gen SCN4A, que codifica la subunidad alfa (α) del canal de sodio muscular o canal de tipo IV. Se trata de una proteína transmembrana de 1.836 aminoácidos que, junto a la subunidad beta (β) del canal, media la permeabilidad de las membranas musculares excitables a los iones de sodio. El canal adopta conformaciones abiertas o cerradas en función de las diferencias de voltaje y el sodio pasa a través del poro de acuerdo con su gradiente electroquímico. El gen, que tiene 24 exones y se localiza en el cromosoma 17q23.3, fue identificado como la causa de la enfermedad mediante cartografía genética y análisis mutacional. (B. Narberhaus; 2008)

Normalmente para evitar que el músculo se contraiga continuamente, el canal de sodio se cierra mediante su compuerta de inactivación rápidamente después de que se abra y tome contacto con el ion. Con el tiempo, los iones de potasio salen de las células musculares, repolarizando así a las células y provocando el bombeo de calcio fuera del aparato contráctil para relajar el músculo. (Ganong, 2010)

Mediante el estudio génico de Narberhaus y otros investigadores, se determinó además que se presenta un cambio en heterocigosis, una transición nucleotídica de Citocina a Timina en el exón 13 del gen, que resulta en una sustitución aminoacídica de treonina (Thr) a metionina (Met) en el residuo 704 de la proteína (c.2111C>T, p.Thr704Met).

En cambio, en el equino esta mutación de punto consiste en una sustitución de Citosina a Guanina en el gen que codifica el dominio transmembranal de la sub-unidad alfa del canal de sodio muscular. El intercambio de citosina por guanina de la proteína SCN4A resulta en la sustitución de un residuo fenilalanina por leucina el cual es más pequeño que el residuo de la fenilalanina, resultando fisiológicamente o electroquímicamente en la fuga del ion sodio, a través del poro de la membrana celular que debería permanecer cerrado cuando no está bajo estimulación nerviosa (que generaría una contracción muscular) (Reynolds, 1997). La mutación en esta especie fue aislada en 1994 por investigadores de la Universidad de Pittsburgh, con una subvención de diversas organizaciones de equinos; los mismos desarrollaron un análisis de sangre el cual es utilizado actualmente para la identificación de los individuos afectados.

Las mutaciones, alteran la estructura normal y la función del canal de sodio e interrumpen de este modo la regulación de la contracción muscular, originando así cierta susceptibilidad a los episodios de parálisis del mismo.

“La sustitución aminoacídica impide la inactivación del canal que sigue normalmente a un potencial de acción, dando lugar a un flujo incontrolado de sodio hacia el interior de la fibra muscular. Como consecuencia, la fibra se despolariza activando la entrada de calcio desde el retículo sarcoplasmatico para causar la contracción del músculo, impidiendo la generación de nuevos potenciales de acción. La entrada masiva de sodio dentro de las células provoca una salida de potasio que explica los niveles aumentados de este catión en sangre que son característicos de la enfermedad.” (B. Narberhaus; 2008)

El fallo de los canales de sodio para inactivar correctamente se ve favorecido frente a  factores como el estrés o cuando los niveles de potasio en la sangre fluctúan. Esto último puede ocurrir con el ayuno seguido por el consumo de un alimento rico en potasio, como la alfalfa. (ucdavis.edu., 2015)

Descendencia.

Desde el año 1998, la AQHA (American Quarter Horse) exige revelar la condición genotípica de la HYPP en los documentos de registro de todos los potros que descienden de alguna línea genética identificada como portadora del gen portador. Si un potro y sus progenitores no han sido analizados para el gen HYPP, los documentos de registro deberán llevar la leyenda: “Este caballo tiene un ancestro conocido como portador del gen HYPP, designado de a cuerdo a las reglas de la AQHA como un defecto genético. La AQHA recomienda realizar el examen respectivo para confirmar la presencia o ausencia de este gen” (Crabbe, 1998).

Según los resultados de los análisis realizados a los equinos para el gen HYPP el documento de registro del animal llevará la designación “N/N”, “N/H” o “H/H”. (Ayala, M., 2005)

Homocigota recesivo: N/N. resulta negativo para la enfermedad, lo cual significa que no es portador del gen HYPP y por ende no lo transmiten, aunque sean descendientes de Impressive.

Heterocigota: N/H. si tiene una copia o alelo del gen el caballo resulta positivo a la mutación. Estos caballos se ven afectados en un grado menor.

Homocigota dominante: H/H. Si tiene dos alelos del gen. Darán lugar a toda la descendencia que lleva el gen defectuoso, independientemente del estado del otro progenitor. El fenotipo se muestra como severamente afectado.

Se concluye con esto que los animales homocigótos para la mutación (H/H) son severamente más afectados que los heterocigótos (N/H) (Beech et al., 1993) y por esto se deben de tener en cuenta las siguientes posibilidades de apareamiento:

  • Un equino (♂ o ♀) heterocigótico para la mutación (N/H), tiene un 50% de probabilidad de transmitir una copia del gen anormal (H) a su descendencia cuando es apareado con un equino normal (N/N) mientras que el otro 50% lleva la mutación (N/H).
  • Un equino (♂ o ♀) heterocigótico para la mutación (N/H), tiene un 75% de probabilidad de procrear un potro con HYPP (50% N/H; 25% H/H), cuando es apareado con otro equino también heterocigótico (N/H)
  • Un equino (♂ o ♀) homocigótico para la mutación (H/H), tiene un 100% de probabilidad de procrear un potro con HYPP (100% N/H), cuando es apareado con un equino normal (N/N). . (Ayala, M., 2005)

De esta forma, sólo cruzando animales sanos (N/N), previamente detectados por diagnóstico molecular de Parálisis Periódica Hipercalémica, podría reducirse la incidencia de la mutación y eventualmente eliminarse (Naylor, et al. 1999, Spier, et al. 1990), a la vez que se conservan los rasgos deseables de la línea del semental Impressive. (Spier, 1993).

Sintomatología.

 

Los síntomas principales de la enfermedad en el animal son la rigidez, tremor (hiperexcitabilidad) o debilidad muscular, prolapso del tercer párpado, relincho anormal (por afección de los músculos de la laringe) y convulsiones en ocasiones acompañadas de parálisis de músculos respiratorios y cardiacos que pueden derivar en la muerte por falla cardiaca o respiratoria (Bowling et al., 1996). Estos síntomas se manifiestan principalmente en la etapa adulta de los animales afectados, pero pueden aparecer algunos de ellos  entre los dos a tres años de edad dependiendo de la influencia que tienen las prácticas de manejo como el transporte y la alimentación que estimulan dicha alteración (dado que puede ser agravada por incremento de potasio o frío). Factores como la edad, el género, y la cantidad de músculo no son importantes para la predicción de síntomas HYPP.

 

La HYPP en ocasiones es confundida con el síndrome de cólico ya que los animales afectados normalmente caen por la debilidad muscular, presentando similar incoordinación de las extremidades y los sonidos respiratorios. Pero a diferencia del cólico, la duración de una convulsión es muy rápida y el caballo está totalmente normal después de la recuperación. (ucdavis.edu, 2010)

El ataque convulsivo se produce cuando el potasio sale de la célula al torrente sanguíneo y la célula se llena de sodio produciendo una alteración en la conducción eléctrica hacia los músculos, esto surge como mecanismo compensatorio fisiológico para tratar de evitar el acumulo excesivo de cargas positivas en el interior de la célula. Los equinos son plenamente conscientes y lúcidos durante un ataque. (ucdavis.edu, 2010)

Así mismo, se han reportado manifestaciones subclínicas de animales afectados. (Citado por Moreno Chapa, J. 2007)

 

Diagnostico de la enfermedad

Una forma de llegar al diagnóstico de la enfermedad es analizando una muestra de sangre conservada en citrato sódico tomada durante uno de los ataques, para confirmar la hipercalemia, ya que en ese momento siempre se manifiesta un repentino incremento en la concentración de potasio en suero (por arriba de 8 a 9 mEq/L). Tal aumento indica que se ha alterado la entrada y salida convencional del electrolito. (Wikipedia, 2014)

El genotipo de los individuos también puede determinarse mediante una Prueba de Reacción en Cadena de  Polimerasa y Polimorfismo de Longitud en Fragmentos de Digestión (PCR-RFLP), que consiste en una amplificación in vitro de un fragmento específico del gen (Ácido DesoxirriboNucléico -ADN) del canal de sodio seguida de una separación electroforética de los productos de PCR digeridos por la enzima de restricción Taq I de los productos amplificados (Rudolph et al., 1992). De esta forma, para distinguir entre un individuo que presenta una mutación y otro que no, se elige la enzima de restricción que reconozca su sitio de corte (en un genotipo u otro), de forma que el corte se efectúe sólo en los individuos de un genotipo determinado. Posteriormente se visualizara este polimorfismo de longitud de fragmento de restricción (RFLP) del ADN amplificado a través de un corrimiento electroforético en gel de agarosa (Rudolph et al. 1992) mostrando en una o dos bandas los productos de PCR digeridos (Griffiths et al 1995, Puertas 1999). Esta técnica muestra una precisión de 99% (citado por Moreno, J. 2007 desde Bowling et al. 1996).

El fragmento del gen donde se da la mutación a través de la amplificación originada por la enzima termoestable Taq polimerasa, proveniente de una bacteria (Thermus aquaticus),  efectúa el proceso de polimerización de una cadena complementaria de ADN, obteniéndose millones de copias del fragmento de interés. (citado por Moreno, J.)

“La enzima de restricción Taq I lo corta si no existe la mutación, originando dos fragmentos, mientras que si la hay sólo se genera un fragmento para encontrar la mutación dentro del gen específico. Esto consiste en una amplificación de un fragmento específico del gen del canal de sodio, el cual es después digerido con una endonucleasa (enzima de restricción Taq l) que lo corta si no existe la mutación, originando dos fragmentos, mientras que si la hay solo se genera un fragmento” (Rudolph et al. 1992).

Los iniciadores a utilizar permiten la amplificación, por la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa, de la secuencia correspondiente al segmento del gen donde ocurre la mutación, específicamente en la base nitrogenada 2188 de su ADNc. Los iniciadores de PCR son los siguientes (Rudolph et al. 1992):

IVS2F: 5′-GGGGAGTGTGTGCTCAAGATG-3′

IVS3R: 5′-AATGGACAGGATGACAACCAC-3′

La mezcla de reacción se ejecuta mediante el empleo del estuche para PCR Taq & Go para la amplificación.

Para llevar a cabo la verificación del genotipo las bandas observadas por efecto de la digestión de los productos de PCR por la enzima de restricción, deben evidenciar los siguientes genotipos (Rudholp et al. 1992):

  • Normal (homocigoto recesivo, N/N): una banda de 64 pares de bases (pb) y una banda de 28 pb.
  • Afectado (heterocigoto, N/H): una banda de 92 pb, una de 64 pb y una de 28 p.b.
  • Afectado (homocigoto dominante, H/H): una banda de 92 pb. (Figura 6 del anexo)

Tratamiento.

Los equinos afectados pueden ser tratados con  posibilidad de reducir los signos clínicos, pero el grado que ayuda a tratamiento médico varía entre los individuos. No existe una cura.

Algunos, se ven más afectados por la enfermedad que otros y algunos ataques serán más graves que otros, incluso en el mismo individuo.

Para un atraque leve el tratamiento indicado es un poco de ejercicio, ingestión de alimentos ricos en carbohidratos o suplementados con glucosa. Se pueden necesitar diuréticos como la furosemida para detener los ataques. Acetazolamida y diuréticos de tiazida, tales como clorotiazida también son eficaces.

En cambio, el tratamiento para un ataque severo usualmente consiste en la administración intravenosa de reconstituyentes de dextrosa, calcio y sodio. El calcio intravenoso disminuye la actividad de los canales de sodio pudiendo detener los ataques. (Carlos, J., 2015)

La glucosa por vía intravenosa y la insulina estimula la captación de potasio en la célula por la Na-K ATPasa y pueden reducir la debilidad sin una pérdida de potasio corporal total.

 

Se debe considerar también, la implementación de las buenas prácticas en las explotaciones equinas tales como inocuidad de alimento de los equinos; salud e higiene del personal; calidad del agua de bebida de los equinos; programa para el control de fauna nociva; manejo de excretas y uso apropiado de medicamentos veterinarios (después de realizado el diagnóstico) siendo utilizados de acuerdo a las recomendaciones, dosis, tiempos de retiro y caducidad. (Carlos, J., 2015)

A modo de conclusión y síntesis.

En los pacientes con mutaciones en SCN4A, el canal no es capaz de inactivar, la conductancia de sodio es sostenido y el músculo permanece permanentemente tensa. Como la placa de extremo del motor es despolarizadas, más señales al contrato no tienen ningún efecto. La condición es hiperpotasemia debido a una concentración de iones de potasio extracelular alta hará que sea aún más desfavorable para el potasio a salir de la celda con el fin de repolarise que el potencial de reposo, y esto aún más prolonga la conductancia de sodio y mantiene el músculo contraído. Por lo tanto, la gravedad se reduciría si las concentraciones de iones de potasio extracelulares se mantienen bajos.

Ésta mutación no se originó como el producto de endogamia, sino que se empezó a manifestar debido a las cruzas selectivas de buscar animales con mejor musculatura (Moreno, J., 2007). Además, como la HYPP es una enfermedad de herencia dominante puede transmitirse a otras razas de caballos que utilicen Cuarto de Milla en su conformación genética.

Dada la propagación de la enfermedad en el mundo se vuelve más relevante la identificación del genotipo de los equinos para determinar así cuan intensa puede llegar a ser la afección que se presenta con mayor intensidad a los caballos homocigoto dominante (H/H) que los heterocigotos (N/H) y que solamente queda exento de padecerla aquel que posea el gen el homocigoto recesivo (N/N).

 

Anexo

Tscherig. Imagen 1.

 

Tscherig. Imagen 2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Figura 1: Fotografia del semental  Impressive (1969-1995) de raza Cuarto de Milla. Campeón y padre de caballos campeones en conformación.

 

Tscherig. Imagen 3

 

Figura 2: Extraída del artículo Parálisis periódica hipercaliémica: presentación de una familia española con la mutación p.Thr704Met en el gen SCN4A en el cual se muestra el ideograma del cromosoma y un esquema del gen que se presenta de manera similar en los equinos.

 

 

 

Tscherig. Imagen 4

Figura 3: Ejemplo de interpretación de resultados del tratamiento de los productos de PCR con la enzima de restricción Taq I. Se muestra los genotipos homocigoto dominante (normal, NN) en el carril 1, heterocigoto (portador, NH) en el carril 2 y homocigoto recesivo (afectado, HH) en el carril 3. Se utilizó el marcador de peso molecular Hiperladder V para verificar el tamaño de los productos de PCR (Moreno Chapa, J. 2007).

Tscherig. Imagen 5

 

Figura 4. Ejemplo de visualización en el fotodocumentador  Fluor- S Multimager*1 (Bio- Rad) de la purificación de ADN a partir de muestras sanguíneas. Carriles 1 y 10: Marcador de peso molecular; carriles 2 a 8: productos de PCR; Carril 9: control negativo. Puede verse que todas las muestras, excepto la del carril 3,(quizá debido a errores de preparación de la mezcla de reacción para PCR siendo ideal que se repitiera el proceso de amplificación)  mostraron el producto de PCR esperado de 92 p. b. (Moreno Chapa, J . 2007)

 

Tscherig.Imagen 6

 

Figura 5: Ejemplo de visualización de análisis RFLP. Puede verse que la Muestra 1 tiene las bandas de 92 y 64 pb., mientras que la muestra 2 solo tiene la banda de 64 pb. La banda de la muestra 3 es un dímero de iniciador. (Moreno Chapa, J., 2007)

Bibliografía

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– Ayala,-Valldovinos, MA.; Anguiano-Estrella R.; Galindo-García, J.; Sánchez-Chiprés DR.; Duifhuis-Rivera, T. (2002). Prevalencia del gen de la parálisis periódica hipercalémica (hypp) equina y del gen del síndrome overo letal blanco (olws) en caballos importados a México. De http://comvepebc.com/wp-content/uploads/2015/07/Prevalencia-de-los-genes-HYPP-y-OLWS-en-Caballos-Importados-a-M-%C2%AExico.pdf/

                                                         

– Ayala-Valdovinos MA, Villagómez, DAF, Galindo-García J, y Sánchez-Chiprés DR. Diagnóstico molecular (PCR-RFL) de parálisis periódica hipercaliémica equina. XXV Congreso Anual de la Asociación Mexicana de Médicos Veterinarios Especialistas en Equinos, A. C. Octubre 8-11 de 2003:141–144. México.

 

-Carlos, J. (2015). Alcances del Diagnóstico Veterinario: El uso de técnicas moleculares. Lavet. Retrieved 16 November 2015, de

Alcances del Diagnóstico Veterinario: El uso de técnicas moleculares

 

– Barrett, K., (2010). Ganong Fisiología Médica. Edición 23a. México, D.F.Editorial Mcgraw-Hill. Sección II. pp: 93-114.

 

-Moreno Chapa, J.,(2007) Determinación alélica de la mutación causante de la parálisis periódica hipercalémica en caballos cuarto de milla y sus cruzas en el noreste de méxico. Tesis de grado de Maestro en Ciencias veterinarias. México, Universidad autónoma de Nuevo León, Facultad de medicina veterinaria y zootecnia.

– Narberhaus, B; Cormand, B.; Cuenca-León, E; Ribasés, M; Monells J. (2008) Parálisis periódica hipercaliémica: presentación de una familia española con la mutación p.Thr704Met en el gen SCN4A. Neurología. 23(7):427-435

-Naylor, J; Niquel, DD; Trimiño, G.; Lightfoot K; Adams, G. (1999) Hyperkalaemic periodic paralysis in homozygous and heterozygous horses: a co-dominant genetic condition en Equine Veterinary. Volumen 31, número 2, Marzo 1999. pp 153-159.

 

-Pirila R, Lehmus S, Somer H, Baumann P. (2002) Hyperkalemic periodic paralysis. Duodecim.118(14):1475-9.5.

 

-Rudolph, J; Spier, S; Byrns, G; Rojas, C; Bernoco, D y Hoffman. (1992). Parálisis Periódica en Caballos Cuarto de milla: una mutación en el canal de sodio difundida por la crianza selectiva. Nature Genetics. 2, 144-147.

 

-Spier, J. (1999) Current facts about Hyperkalemic Periodic Paralysis in horse (hypp) disease. O desde http://www.vgl.ucdavis.edu/-lvmillon/hypp.html./

-Spier, SJ, Carlson, GP, Holliday, TA, et al (1990). La parálisis periódica hipercaliémica en caballos. J Am Vet Med Assoc. 197. Pp 1009-1017. De http://www.vgl.ucdavis.edu/services/hypp.php/

 

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https://www.vgl.ucdavis.edu// (Página oficial Universidad de California, Davis: Medicina Veterinaria.)

 

http://www.aqha.com//

http://www.horsetesting.com/Equine/Genetic_Disease/HYPP.asp (Hyperkalemic Periodic Paralysis Disease)

 

 

¿Como se ve el ADN?

Crédito: Gabriela Iglesias

Crédito: Gabriela Iglesias

Esta pregunta me la hace muy a menudo mis alumnos porque cuando uno realiza una extracción de ADN, el ADN es viscoso pero transparente, entonces como se ve luego en un gel de agarosa si es transparente, tanto el gel como el ADN.

Hasta hace unos años atrás, se usaba el loading buffer con Azul de metileno paa indicar por dónde estaba migrando el ADN por el gel pero para poder realmente ver el ADN se suaba el Bromuro de etidio que es un colorante que bajo luz UV se pude visualizar y como se intercala entre las bases de ADN nos muestra el ADN. Se usa un aparato llamado transiluminador UV

Hoy leyendo un artículo de Vicky Doronina en BitesizeBio.com me encontré con una interesante historia que relata el comienzo y el fin de la era del bromuro de etidio. Como el artículo está en inglés, les quería dejar la traducción

Durante varias décadas, bromuro de etidio (EtBr) era la tinción característica del biólogo molecular para la visulaización de ADN. Ahora, debido a la paranoia colectiva sobre sus supuestos efectos cancerígenos, EtBr se está consignado a los libros de historia, junto con los gradientes de cloruro de cesio (CsCl) , la clonación en fago lambda, y la secuencia de ADN en el laboratorio. Es hora de tener una mirada histórica a donde todo comenzó.

Un comienzo lento

En la década de 1960 el ADN viral, el de los plásmidos y el ADN mitocondrial se separó del ADN genómico de peso molecular mucho más alto por centrifugación de alta velocidad en gradientes de CsCl, una versión muy simplificada de la misma proceso todavía se utiliza durante las preparaciones de ADN de (minipreps) plásmidos: piezas de ADN cromosómico junto con restos celulares separado de  las moléculas de plásmidos más ligeros, compactadas por centrifugación.

A diferencia de los 15 min a 12.000 xg  utilizados para minipreparaciones modernas, la separación en CsCl a cientos de miles de xg tomó días. En 1966 H. Thorne publicó dos artículos (1, 2), en el que mostró una posibilidad de separar el ADN del virus del polioma a partir del ADN de la célula huésped usando electroforesis en gel de ADN radiomarcado.

Seis años después de los artículos de Thorne, investigadores holandeses en ADN mitocondrial (C. Aat y P. Borst)  entran en la historia. Al igual que con muchos avances científicos, era como el resultado de que algo salga mal, lo que les llevó a su descubrimiento- en su caso, la ruptura de la ultracentrífuga.

Conocer la existencia de documentos de Thorne, los investigadores decidieron ver si podían separar el ADN mitocondrial en un gel. Se utilizaban de forma rutinaria en los gradientes de EtBr para separar diferentes formas de ADN mitocondrial (superenrollado, circular y lineal), era lógico para usarlo en los geles también. Además, los autores dicen que “siempre admiraban las bandas de color naranja brillante en los gradientes”, por lo que el placer estético jugó un papel en el desarrollo de la ciencia.

A partir de los primeros en adoptarlo a la actualidad

Pero el resto no es historia. Aunque la separación de ADN mitocondrial en un gel usando EtBr ha resultado tan exitoso que Aat y Borst Nunca volvieron a reparar la centrífuga, no siguieron trabajo (1.972 3) con más estudios en esta área (4).

Una revisión histórica actual por un ganador del Premio Nobel de la R. Roberts(5) cita otro artículo escrito por Sharp et al (1973) (6) donde se explicaba como usar una tinción de EtBr durante la separación del ADN por electroforesis de ADN. Aunque de Sharp et al utiliza la misma lógica de comenzar con tinción EtBr en gradiente, seguido de tinción de geles después de la corrida electroforètica y / o la adición de EtBr a los geles como Aat y Borst, que no citan el documento anterior. Formalmente, Aat y Borst tienen una prioridad porque publicaron el método primero, pero de el artículo de Sharp et al se cita 3 veces más frecuentemente, probablemente debido a su incorporación a la utilización de otra tecnología de vanguardia 1970 – digestión del ADN con enzimas de restricción.

¿Donde esta ahora?

Ahora, a principios del 21 st siglo EtBr está siendo ampliamente utilizado en muchos laboratorios aún, pero la combinación de su supuesto efecto cancerígeno y su exigencia de luz UV ha causado una fuerte presión en la salud y seguridad, para reemplazarlo en muchas instituciones. Muchos laboratorios fueron “EtBr libre” y probablemente no hay vuelta atrás. Varios tintes o tinciones alternativas están actualmente en uso como sustituto de EtBr, usted puede leer sobre ellos en este artículo.

La historia del ascenso y caída de EtBr muestra un patrón visto a menudo con técnicas científicas: saltos intuitivos basados ​​en ideas previas, a menudo olvidados; un comienzo lento seguido por la adopción generalizada. Por último, el descenso en una controversia de quién lo usó por primera vez.

Literatura:

Literature:

  1. Thorne H. V. Electrophoretic separation of polyoma virusDNA from host cell DNA. Virology (1966), 29, 234 – 239.
  2. Thorne H. V. Electrophoretic characterization and fractionation of polyoma virus DNA. J. Mol. Biol. (1967), 24, 203 – 211.
  3. Aat C. and Borst P. The gel electrophoresis of DNA.Biochim. Biophys. Acta(1972), 269, 192 – 200.
  4. C. Aat and P. Borst. Ethidium DNA Agarose Gel Electrophoresis: How it Started. IUBMB Life, 2005, 57(11): 745 – 747
  5. Roberts R.J. How restriction enzymes became the workhorses of molecular biology.PNAS (2005), 102(17), 5905 – 5908
  6. Sharp P. et al. Detection of two restriction endonuclease activities in Haemophilus parainfluenzae using analytical agarose–ethidium bromide electrophoresis. Biochemistry (1973), 12(16), 3055-63.

Espero les hasya gustado como a mí.

Si prefieren leer el artículo orginal en inglés, les dejo el link abajo

Fuente: http://bitesizebio.com/25292/burning-bright-a-brief-history-of-ethidium-bromide-dna-staining/?utm_content=24584782&utm_medium=social&utm_source=facebook

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